OriGene Technologies, Inc.
  邮箱:  密码: 忘记密码?
注册 | 购物车 | 主页
搜索:    
About FL cDNA Clones RNAi Gene Expression Lysates and Proteins Antibodies Tissue IVD 原料 Other Products Tech Support
orange


抗体及Western blot抗原标准常见问题解答

为什么OriGene的抗体产品是最好的?
回答: OriGene的抗体全部经过Western Blot验证,并且保证在预期的分子量大小处识别产品附带的抗原标准品。另外,随每支抗体附赠的抗原过表达细胞裂解物可以作为阳性对照使用,以确保抗体的有效性。

OriGene的抗体产品能够提供哪些承诺?
回答:我们承诺经过鉴定的抗体保证识别随产品附赠的抗原标准品中的目的蛋白。如果在实验中遇到任何抗体无法识别OriGene的VERIFY过表达裂解物的情况,我们的技术专家会帮助您解决问题并优化实验条件。

OriGene如何提供这样的质量保障?
回答:OriGene拥有世界上最大的全长cDNA克隆库. 我们利用cDNA克隆库中的TrueORF cDNA克隆转染到HEK293T细胞中进行过表达,并获得过表达裂解物。这样得到的带myc和DDK标签的高质量抗原标准品可以用来鉴定OriGene的抗体产品是否能应用于Western Blot分析。只有满足了我们严格的质量控制标准和符合高特异性、高灵敏度等指标之后的抗体,才会作为产品上市。

OriGene如何保证我感兴趣的抗体能够识别内源的、过表达的或表达下调的蛋白?
回答:OriGene只出售能够特异性识别抗原标准品中目的蛋白的抗体,并且识别的目的蛋白要符合预期分子量大小。

OriGene能够保证抗体产品能够识别客户提供的内源的、过表达的蛋白吗?
回答:不能。因为OriGene不能确定您的细胞系、组织或者过表达产物的表达水平是否能被Western blotting检测到。我们只能承诺我们的抗体保证识别随产品附赠的抗原标准品中的目的蛋白。

OriGene的抗体产品价格与其他厂家的抗体价格相比如何?
回答:一般来说,OriGene的抗体产品和Western blot试剂要比其他厂家的产品更便宜,同时我们保证抗体的高质量。另外,我们还提供一支VERIFY过表达裂解物(带标签),用于抗体质量的验证。

OriGene是否单独出售确认过的过表达裂解物?
回答: 是的。 我们单独出售大包装的VERIFY过表达裂解物(带标签)。请浏览我们网站 查询过表达裂解物产品列表。

抗体是单克隆抗体还是多克隆抗体?
回答:对于基因特异性的抗体产品,我们既提供单克隆抗体,也提供多克隆抗体。产品的详细信息可以浏览OriGene的网站抗体页面。 我们所有的标签抗体产品均为小鼠单克隆抗体。HRP标记的二抗产品为山羊抗小鼠多克隆抗体。(TA100015)。

OriGene的抗体可以用于免疫组化(IHC)或免疫荧光(IF)吗? 可以用于石蜡包埋 (FFPE)的样本吗?
回答:每个抗体的应用范围都不同。客户可以浏览OriGene网站抗体页面查询感兴趣的抗体的应用范围和数据结果。

你们是怎么预测每个抗体的目的蛋白的分子量的?
回答:我们主要使用swissprot网站帮助预测蛋白的分子量大小。链接: http://www.expasy.org/sprot/

What are the terms of OriGene Western detecting reagents guarantee?
回答:我们承诺我们的HRP标记的抗小鼠二抗(TA100015)及Western Blotting化学发光试剂(TA100016)可以检测到标签单克隆抗体。如果在实验中遇到任何抗体无法识别OriGene的VERIFY过表达裂解物的情况,我们的技术专家会帮助您解决问题并优化实验条件。

你们提供同型对照吗?
回答:否。因为我们只提供经过验证的抗体,所以我们认为没有必要再提供其他的Western blotting对照品了。如果您需要,可以从其他公司购买对照IgG。

我怎么才能正确选择合适的二抗产品?
回答:选择合适的二抗是要根据您使用的一抗决定的。一般的规则是二抗的应用种属必须是您使用的一抗的宿主。比如,如果您使用的一抗是小鼠单克隆抗体,那么您就需要选择一个抗小鼠的二抗。OriGene也提供HRP标记的二抗产品(TA100015)和ECL发光液。

我应该如何选择一抗的稀释度?
回答:Origene绝大部分抗体产品的说明书中都有推荐稀释度。但请注意推荐的稀释度和浓度只是对初次实验的推荐参数,在后续实验中还是需要针对得到的结果进行调整和优化。如果厂家没有推荐稀释度,则下表可以作为初次实验的参考。
  Tissue culture supernatant Ascites Whole antiserum Purified antibody
WB / dot blot 1/100 1/1000 1/500 1 ug/ml
IHC / ICC neat neat - 1/10 1/100 1/50 - 1/100 5 ug/ml
EIA / ELISA 1/1000 1/10000 1/500 0.1 ug/ml
FACS / Flow Cytometry 1/100 1/1000 1/500 1 ug/ml
IP   1/100 1/50-1/100 1 - 10 ug/ml

为什么western blot band条带的大小和预测的分子量大小不同?
回答:在Western Blotting分析中,蛋白在胶中的迁移情况是依据分子量大小来决定的。但即使是这样,Western Blot得到的条带大小依然会和预计的分子量大小有出入。大部分常见的原因如下:

  1. 翻译后修饰—比如蛋白的磷酸化,糖基化等,这些都会增加蛋白的分子量大小。
  2. 翻译后剪切—比如很多蛋白首先被合成为前体形式,然后通过剪切获得生物学活性,比如pro-caspases。
  3. 剪接变异体—相同的基因,经过选择性剪接会产生不同分子量大小的蛋白。
  4. 相对电荷—氨基酸的组成 (带点 vs 不带电)
  5. 多聚体—比如蛋白二聚体。但是尽管相互作用很强的蛋白会出现分子量偏高的条带,不过通常在还原(reducing)的条件下不会有问题。

我应该如何保存抗体?
回答:客户收到抗体后,应该按照抗体说明书中的条件保存抗体。如果抗体不按照说明书中的条件保存,我们不能保证抗体能够工作。

我应该如何使用VERIFY抗原标准品(带标签)对抗体进行鉴定?
回答:如果做Western Blot鉴定,过表达裂解物应该用2xSDS样品缓冲液进行稀释。然后放入-80℃冰箱长期保存。做SDS-PAGE前,加入变性剂(100mM DTT or 2.5% ?-ME)并70℃煮样10分钟。

每次上样我应该用多少裂解物?
回答: 因为VERIFY抗原标准品(带标签)是基因特异性过表达裂解物,最佳的SDS-PAGE上样量应该根据预实验的结果决定。据我们的经验,推荐客户使用20ul的2xSDS loading dye稀释裂解液,并每条道上样5ul。

我能用抗原标准品来做免疫沉淀(IP)和其他实验吗?
回答:抗原标准品的保存形式为液体,缓冲体系为RIPA buffer。只能用来做免疫沉淀(IP)、ELISA标准品和蛋白-蛋白相互作用。

Q: 为什么我的抗体检测抗原标准品出现了好几条带?
A:
回答:对于这种情况,有几种可能的原因。首先,裂解物来源于HEK293T细胞,所以表达的抗原会带有不同类型和程度的修饰(比如糖基化、泛素化和乙酰化),这样在Western blotting中会条带的分子量的大小有所增加。另外,即使我们的抽提缓冲液中含有蛋白酶抑制剂,但是依然有可能发生蛋白水解的情况。在这种情况下,我们的anti-DDK抗体只能识别带有DDK标签的蛋白片段,而相应的抗体则可能识别不带标签的蛋白片段。同样,有些膜蛋白在SDS-PAGE电泳或样品的制备过程中,会聚集在一起。这样就导致了大分子量条带的出现。还有一种可能就是抗体不但检测到了带有myc-DDK标签的过表达蛋白,而且检测到了内源蛋白,这样就会出现些微的分子量差别。

Q:我需要引用你们的产品来发表一篇文章,我应该怎么写?
A:
答:我们建议您使用产品的编号(具有唯一性),并且写明OriGene Technologies (Rockville, MD)。此外,如果您的文章发表,我们非常希望您能通知我们,同时我们会送给您一个小礼品。

 

全国免费电话:400-6744-363(手机),800-9904-363(座机)订货邮箱:orderscn@origene.com,techsupport@origene.cn
电话:+86-10-59755312 传真:+86-10-59755322-888 地址:北京市经济技术开发区科创14街99号汇龙森科技园11栋
京ICP证07031721号 Copyright © 2017 北京傲锐东源(OriGene Technologies)生物科技有限公司,All Rights Reserved. 法律声明.