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OriGene RNAi验证载体

使用RNA干扰(RNAi)实现基因沉默时,会遇到一些不可预估的情况,这通常需要研究人员花费大量的时间在沉默(敲除)应用中确定效率、选择最佳的构建体和进一步优化实验。同时,检测还需要用到抗体(可能无法获得)、昂贵的Q-PCR探针、表型测定或昂贵的仪器。
为了解决以上问题,OriGene构建了融合结构的RNAi验证载体,其中嵌入了OriGene的全长TrueCloneTM和荧光素酶报告基因。

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使用这种新的工具,只需发光检测器,就可以验证RNAi对目的标靶的特异性的沉默效率。使用RNAi验证载体,可以迅速地找到最有效的敲除结构并优化转染条件。

常见问题解答                    实验手册                                 使用指南 

与所有RNAi技术兼容  目前有三种RNAi基因沉默平台可以引发RNAi现象。短干扰RNA(siRNA)、短发卡RNA(shRNA)和micro RNA(miRNA)。RNAi验证载体都可以验证这三种基因敲除技术平台的效率。

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HuSH RNAi 目标验证载体 (pCMV-Luc (V)

使用独特的限制位点,靶基因被克隆到载体3’端和萤火虫荧光素酶之间,然后将此载体转染至选定的哺乳动物细胞中,转录出一个杂合构建体。针对靶基因的HuSH shRNA或其他RNAi的共转染,会产生siRNA。这些siRNA会与目的mRNA结合,并开始RNAi的过程。萤火虫荧光素酶-目的基因转录水平会下调,并且荧光素酶的信号降低,此时可以测定RNAi针对目的基因的特异性和结合强度。

  • 使用简单 - 在Not I酶切位点进行简单的消化与连接,OriGene的任何一个TrueCloneTM可以被亚克隆至RNAi验证载体中
  • 高通量应用  - 因为亚克隆很简单,所以此报告系统可以用来同时优化多个基因和细胞系
  • 检测可靠 - RNA干扰使报告载体中感兴趣的基因与荧光素酶/Luc融合的mRNA下调,从而导致荧光素酶信号的衰减,由此可以评价RNAi的效果。

萤火虫荧光素酶编码的区域被克隆至OriGene的pCMV6-XL5载体中的Xba I克隆位点。pCMV6-XL5载体中5’端的Not I位点突变后,在荧光素酶cDNA下游留下一个特别的Not I克隆位点。此载体的完整序列可以点击此处下载.

 

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