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HuSH-29: 预设计 shRNA

HuSH-29综述
HuSH-29设计
单个基因抑制
逆转录病毒转染
HuSH 性能保证
纯化质粒 DNA
对照质粒
使用指南
常见问题解答


HuSH-29综述

利用shRNA进行基因沉默已经成为研究基因在疾病和发生途径中的作用的一个主要工具。过去,使基因功能失活或被干扰的手段非常繁琐而且不可靠。使用经典的遗传学方法产生和绘制基因突变更是一个非常缓慢而且费用昂贵的过程。现在有了HuSH-29发夹产品这种新型研究工具,基因功能的研究的速度就可以大大地被提高,费用被降低。

HuSH-29发夹表达克隆的长度和设计相对于使用21mer和siRNA设计而言是一个重大的提高。更长的shRNA可更有效地进入RNAi途径,比短的质粒或siRNA的效价和特异性高的多。在大多数哺乳动物细胞中,长的双链RNA会激发干扰素应答,如同抗病毒反应。这种干扰素反应会诱导蛋白质合成全面关闭,这就妨碍使用长的双链RNA进行特异性基因沉默。使用少于30个碱基对的shRNA可克服这个障碍,这可避免哺乳动物干扰素反应并开始强效而特异性的基因沉默。HuSH-29具有最合理的长度和更高的效率、最低的干扰素应答等优势。

HuSH-29设计

大多数RNAi公司都有现成的载体,在构建质粒时使用的技术大多是陈旧的。OriGene使用了29mer短发夹设计,已经证明它比21mer更有效。目前还在采取措施继续改善用于HuSH-29 shRNA产品序列选择的算法,并使其达到最优化。避免带有3个“G”、3个“C”、4个“A”和4个“T”的序列。

  • GC的含量为55%,范围在30%和70%之间
  • 选择5'端的GC含量高于3'的
  • 避免内部回文序列
  • 序列对于基因识别是特异性的,并靶向尽可能多的那个基因座的转录变异体
  • 尽可能与人和小鼠转录物都要配对的靶序列

OriGene提供了4个纯化的质粒载体,可单独或联合用于暂时或稳定的基因沉默研究。除了设计严格外,OriGene的HuSH-29产品可确保您的成功。

单个基因抑制

导入细胞的siRNA缺乏自我复制的能力。由于细胞分裂的稀释,这些细胞最终会失去寡核苷酸。在暂时的转染中,siRNA对细胞系统的作用在转染后几天之内将显现,只能持续几天。在稳定的转染中,导入带选择标记的表达短发夹RNA(shRNA)的质粒后,可通过短发夹载体的表达选择持续基因抑制的细胞。一旦扩大后,这些细胞永久性含有正确的载体并表达所载有的shRNA。研究者然后进行功能分析,测定基因抑制的效果。对于短周期实验,任何RNAi工具都可适用,而长周期实验则需要稳定转染表达载体或病毒载体。

HuSH-29被认为是RNA干扰的最佳选择,因为它符合任何单个实验的暂时或稳定转染的要求。

逆转录病毒转染

一些永生细胞系很容易使用脂质体或电穿孔进行转染,而很脆弱以及很难转染的细胞需要由病毒传送。RNAi的逆转录病毒转染可提供持续性的沉默。当细胞使用载有shRNA的逆转录病毒载体进行转染并使用抗生素进行选择时,shRNA表达盒可以稳定整合至宿主基因组。这是与siRNA寡核苷酸相比的一个主要的优点,siRNA寡核苷酸仅仅沉默5至7天。而许多的研究要求更长的持续期才能取得理想的效果。逆转录病毒整合至宿主基因组能高效产生稳定的基因沉默细胞系。

HuSH 性能保证

OriGene对于所有的HuSH shRNA产品可提供性能保证。如果OriGene载体不能产生至少70%的基因表达抑制,我们将与您一起发现问题所在。如有必要,OriGene将免费更换与您的靶基因配对的HuSH载体。

纯化质粒 DNA

为了您的方便,每个载体都包含5ug的现成的质粒,不需支付额外的费用。您可使用纯化的DNA 立即开始您的实验,并可立即验证所插入的序列。所提供的纯化DNA可节省时间、方便储存并能降低污染。

对照质粒

HuSH产品含两个对照质粒: 阴性对照和阳性对照.

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