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OriGene联合CELL杂志共同出版的
CRISPR论文集
Video overview of cDNA clone
offering
Video brochure for cDNA clone
OriGene cDNA clones in recent publications
Epilepsy-associated GRIN2A mutations reduce NMDA receptor trafficking and agonist potency - molecular profiling and functional rescue Sci Rep 2017 [GRIN2A]

Matrix metalloproteinase processing of PTHrP yields a selective regulator of osteogenesis, PTHrP1-17 Oncogene 2017 [PTH1R]

Whole-Exome Sequencing of Congenital Glaucoma Patients Reveals Hypermorphic Variants in GPATCH3, a New Gene Involved in Ocular and Craniofacial Development. Sci Rep 2017 [GPATCH3]

Ziploc-ing the Structure 2.0: endoplasmic reticulum resident peptidyl prolyl isomerases show different activities toward hydroxyproline J. Biol. Chem. 2017 [FKBP2]

可供选择的用于克隆的载体

OriGene有两种类型的载体提供给客户。OriGene所有的TrueClones构建在pCMV6克隆载体上,都可直接购买用做阴性对照。
pCMV6-XL4
PCMV6-XL5
PCMV6-XL6

emptypCMV6vector

此外,OriGene提供新霉素抗性的pCMV克隆载体,便于客户用我们的TrueClones建立稳定细胞系。
pCMV6-NEO

pcmv-neo vector
引物和启动子序列可单独下载

载体描述

TrueClone库中所有的cDNAs被克隆到pCMV的载体系列上,便于大规模的实验。载体质粒来源于David Russell博士的实验室。全长cDNA片断可以直接被插入到真核转录启动子的下游,这个启动子可以在多种哺乳动物细胞株和转基因小鼠里表达异源基因。
CMV启动子受美国专利5,168,062 及5,385,839的保护,它仅适用于研究。如果有其它的目的,需要获得Iowa大学研究基金会的批准。(214 Technology Innovation Center, Lowa City ,IA 52242)
三个OriGene 的 pCMV6载体具有相同的多克隆位点(MCS)和基本相同的质粒结构;pCMV-XL6含有SP6转录启动子而pCMV-XL4 和 pCMV-XL5 含有离体无细胞系统的启动子T7。载体系列的基本框架如下图。

载体序列: 基因库确认号 AF067196

pCMV6-XL4 pCMV6- XL5 pCMV6-XL6 pCMV6-Neo

载体pCMV6-XL4, XL5 及XL6的主要功能特点:

  • 载体大小:: 4.7kb
  • 大肠杆菌中的选择标记: 氨苄青霉素抗性
  • 哺乳动物细胞选择标记: 无。仅用于即时转染
  • 用于哺乳动物细胞中载体表达的启动子: CMV 启动子
  • 用于离体无细胞系统的启动子: 用于pCMV6-XL4 和pCMV6-XL5的T7及 用于pCMV6-XL6的SP6
  • 克隆位点: EcoRI 和 SalI。 在克隆形成后,EcoRI 位点依然完整, 但是SalI 的位点被破坏了
  • 用于移除插入片段的限制酶切位点: 用NotI。 *有两个NotI位点在载体中的克隆位点的两端
  • 适于转染的细胞株: COS, 293, Hela, CHO, NIH3T3, Mouse L cell,等
  • 转录终止及多腺苷酸化信号: 来自人生长激素基因(hGH)

VectorMap

为成功地进行高水平的转基因表达,我们开展了大量的针对构建载体的工作。用pCMV质粒与其它流行表达质粒pCDNA3.1 (Invitrogen)进行比较,具有相类似的表达水平。

Comparison of pCMV to pCDNA3

Fig 1. pCMV6- 及 pCDNA3.1基质粒中的转基因表达水平比较。将CAT基因克隆在pCMV6及pCDNA3.1载体中的启动子的下游。在三个试验中,将同量的质粒DNA转染至COS1细胞,并且对CAT活性进行测定。

参考文献:
Cloning, structure and expression of the mitochondrial cytochrome P-450 sterol 26-hydroxylase, a bile acid biosynthetic enzyme. J Biol Chem. 1989 May 15; 264(14): 8222-9. Andersson S, Davis DL, Dahlback H, Jornvall H, Russell DW.

Expression cloning and regulation of steroid 5 alpha-reductase, an enzyme essential for male sexual differentiation. J Biol Chem. 1989 Sep 25;264(27):16249-55. Andersson S, Bishop RW, Russell DW

 

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